DNA 分子遗传标记在中药中的应用 DNA 分子遗传标记 广义的分子标记（molecular marker ）是指可遗传的并可检测的DNA 序列或蛋白质。常用的是狭义的分子标记概念，即DNA 分子标记。DNA 分子标记主要分为以下三类 一、限制性片段长度多态性（RFLP ）：是发展最早的分子标记技术，以分子杂交为核心技术。二、DNA 序列测定三、基于PCR 的分子标记：根据引物的选择可分为随机引物扩增和特定序列位点扩增。1. 随机扩增多态性DNA （Random amplified polymorphic DNA,RAPD ）。随机引物扩增PCR （Arbitrary Primer-PCR,AP-PCR ）2 、DNA 扩增产物指纹分析（DNA amplification fingerprinting,DAF ）:与RAPD 技术不同的是引物浓度更高，长度更短（5 ～8 个bp ），只有2 个温度循环（在RAPD 中是3 个温度循环），一般用聚丙烯酰胺凝胶电泳。3 、特征扩增区段测序（Sequence-characterized amplified regions ，SCAR ）：先做RAPD 分析，然后克隆目标RAPD 片段进行测序，根据RAPD 片段两末端的序列设计特定引物（一般比RAPD 引物长，24bp ），再进行PCR 扩增，可把与原RAPD 片段相对应的单一位点鉴定出来，可重复性高。RFLP 技术及其应用 RFLP(Restriction Fragment Length Polymorphism ，限制性内切酶切片段长度多态性) 是70 年代发展起来的DNA 片段分析技术。该技术不仅在生物学、医学、农学的许多领域都有了成功的应用，而且在中药材品种基源及其地理品系、栽培品系的质量评价方面也有许多应用。 基本原理 生物在进化过程中，由于种种原因引起基因突变和DNA 分子结构重排，造成了分子内核苷酸排列顺序的改变，当这种改变涉及到限制性酶切位点时，酶切后产生的DNA 片段长度将发生变化，限制性片段的长度在不同个体间呈多态性现象，即称为限制性片段长度多态(Restriction Fragment Length Polymorphism, 简称RFLP) Restriction Fragment Length Polymorphism (RFLP)Enzymes cut DNA at specific sequencesRestriction sites are often palindromes: 6-cutter GAATTC 4-cutter TCGA CTTAAGAGCTDNA 多态性根据其产生的两种基本方式碱基对突变类型( 基因点突变), 即限制性内切酶识别位点上发生了单个碱基替换( 转换或颠换) ，使原有切点消失或产生新的切点。结构重排型，这是由DNA 内部发生较大的顺序变化所引起的 。RFLP 与镰状细胞贫血基本实验步骤...
